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簡陽大耳羊群繁殖的新技術 -冷凍精液及其應用

2020-01-15 15:30:35
  • (一)冷凍精液的原理 常溫或低溫保存的精液,精于仍有代謝作用,所以保存的時間不會太長。現在已能將精液保存溫度降到冰點以下,使精液冷凍起來,完全停止代謝作用,從而使精液保存幾個月甚至長達幾十年。冷凍精液保存時間長,遠距離運輸方便,對普及人工授精,擴大公羊的利用率起著非常重要的作用。冷凍精液的冷凍源有兩種:一種是干冰,即固體二氧化碳,其致冷溫度為-78℃。一般用保溫瓶或冰瓶作容器;另一種是液態氮氣,其致冷溫度達-196℃,因此必須要用液氮罐貯存。由于精液是在冰點以下的溫度中保存,精子的細胞液和細胞質可能會因滲透壓不同而冰點下降度不同。細胞液和細胞質在通過冰點時不能同時凍結造成精子細胞成分分離,從而打擊精子活力,形成不可逆的冷休克。冷凍精液的冷打擊溫度為0~-40℃,。為了減少打擊溫度對精子的傷害,冷凍精液的稀釋液應含有甘油保護成分,其稀釋倍數、稀釋次數及稀釋方法均與常溫或低溫保存相同。 科學家們研究發現,稀釋液中如果含有甘油,就可避免精子發生冷休克,順利地通過滴凍過程中的冷打擊溫度。一般甘油含量為稀釋液容量的7%~10%。冷凍精液稀釋多采用“卵黃~檸檬酸鹽一甘油”,或“卵黃~糖一甘油”稀釋液。為減少甘油對精子的有害作用,先以不含甘油的稀釋液將精液稀釋至最后倍數的一半,經1~2小時緩慢降溫至5℃,再用含甘油的稀釋液進行第二次稀釋。精液經過兩次稀釋后,含甘油的稀釋液對精液起作用需要一定時間,使甘油滲透到精子體內,達到滲透活性物質平衡,使精子具有抗凍能力。處理方法是把精液放進5℃冰箱內平衡2~5小時。 


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  • (二)冷凍精液的方法 根據不同冷源和分裝方式,凍結方法有下列兩類: 1.干冰埋藏法 顆粒滴凍:是用干冰為冷源制作顆粒凍精的方法。在盛滿干冰的容器中,用模板在干冰表面上壓孔,孔徑為0.5厘米,深2~3厘米。用滴管把平衡好的精液按0.1或0.2毫升的量滴入干冰孔窩內,再用干冰封埋2~4分鐘后移液氮或干冰內貯存。 2.液氮熏蒸法 (1)顆粒滴凍 在裝液氮的容器上放一銅紗網,距液氮面1~3厘米預冷幾分鐘,把經平衡處理的精液按定量均勻地滴在紗網上過2~4分鐘,待凍精顆粒變白時再收集到貯精瓶內,移入液氯罐中保存。滴凍過程中,可用消毒鋁飯盒蓋替代銅紗網。 (2)細管、安瓿分裝 精液可采用顆粒滴凍的相同方法處理。 



  • (三)解凍方法 細管、安瓿分裝的凍精,可以直接在35~40℃的溫水中解凍,只等細管或安瓿內的精液融化一半時,便可以從溫水中取出來以備使用。解凍顆粒精液有干濕兩種方法: 1.濕法解凍 是在滅菌試管內注入1毫升1.9%檸檬酸鈉解凍液,將試管在水浴中加熱至35~40℃,取出顆粒精液 投進試管內,搖動融化以備使用。 2.干法解凍 是直接將顆粒凍精置于滅菌試管內,然后在水浴中加熱至35~40℃解凍即可。冷凍精液解凍后立即進行鏡檢,活力達到0.3以上的就可以用于輸精。要提高凍精的受胎率,一般采用1:1的低倍稀釋,40℃干法快速解凍,1億左右有效精子數的大量輸精和一個情期二次重復輸精等方法。



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